Detection of Bartonella henselae DNA in clinical samples including peripheral blood of immune competent and immune compromised patients by three nested amplifications / Detecção de DNA de Bartonella henselae em amostras clínicas, incluindo sangue periférico, de pacientes imunocompetentes e imunodeprimidos por meio de três amplificações duplas

Bacteria of the genus Bartonella are emerging pathogens detected in lymph node biopsies and aspirates probably caused by increased concentration of bacteria. Twenty-three samples of 18 patients with clinical, laboratory and/or epidemiological data suggesting bartonellosis were subjected to three nested amplifications targeting a fragment of the 60-kDa heat shock protein (HSP), the internal transcribed spacer 16S-23S rRNA (ITS) and the cell division (FtsZ) of Bartonella henselae, in order to improve detection in clinical samples. In the first amplification 01, 04 and 05 samples, were positive by HSP (4.3%), FtsZ (17.4%) and ITS (21.7%), respectively. After the second round six positive samples were identified by nested-HSP (26%), eight by nested-ITS (34.8%) and 18 by nested-FtsZ (78.2%), corresponding to 10 peripheral blood samples, five lymph node biopsies, two skin biopsies and one lymph node aspirate. The nested-FtsZ was more sensitive than nested-HSP and nested-ITS (p < 0.0001), enabling the detection of Bartonella henselae DNA in 15 of 18 patients (83.3%). In this study, three nested-PCR that should be specific for Bartonella henselae amplification were developed, but only the nested-FtsZ did not amplify DNA from Bartonella quintana. We conclude that nested amplifications increased detection of B. henselae DNA, and that the nested-FtsZ was the most sensitive and the only specific to B. henselae in different biological samples. As all samples detected by nested-HSP and nested-ITS, were also by nested-FtsZ, we infer that in our series infections were caused by Bartonella henselae. The high number of positive blood samples draws attention to the use of this biological material in the investigation of bartonellosis, regardless of the immune status of patients. This fact is important in the case of critically ill patients and young children to avoid more invasive procedures such as lymph nodes biopsies and aspirates.

Bactérias do gênero Bartonella constituem patógenos emergentes detectados em biópsias de linfonodos e secreções de gânglios provavelmente devido a maior concentração de bactérias. Vinte e três amostras de 18 pacientes com dados clínicos, laboratoriais e/ou epidemiológicos sugestivos de bartonelose foram submetidas a três amplificações duplas para a detecção de fragmento da proteína de choque térmico de 60-kDa (HSP), do espaçador interno 16S-23S rRNA (ITS) e da proteína de divisão celular (FtsZ) de Bartonella henselae, para melhorar a detecção em amostras clínicas. Na primeira amplificação, uma, quatro e cinco amostras, respectivamente, foram positivas pelo HSP (4,3%), FtsZ (17,4%) e pelo ITS (21,7%). Com a segunda amplificação foram identificadas seis amostras positivas pelo nested-HSP (26%), oito pelo nested-ITS (34,8%) e 18 pelo nested- FtsZ (78,2%), correspondentes a 10 amostras de sangue periférico, cinco biópsias de linfonodos, duas biópsias de pele e um aspirado de gânglio. A nested-FtsZ foi mais sensível que a nested-HSP e a nested-ITS (p < 0,0001), possibilitando a detecção de DNA de Bartonella henselae em 15 de 18 pacientes (83,3%). No presente estudo, três nested-PCR, consideradas específicas para a amplificação da Bartonella henselae, foram desenvolvidas, porém somente a nested-FtsZ não amplificou o DNA de Bartonella quintana. Concluímos que amplificações duplas aumentaram a detecção de DNA de B. henselae, e que a nested-FtsZ foi a mais sensível e a única específica para B. henselae em diferentes amostras biológicas. Como todas as amostras detectadas pelo HSP-nested e nested-ITS foram também pela nested-FtsZ, inferimos que, em nossa casuística, as infecções foram causadas por Bartonella henselae. A elevada positividade de amostras de sangue chamou a atenção para a utilização deste material biológico na investigação de bartoneloses, independentemente do estado imune dos pacientes. Este fato é importante no caso de pacientes criticamente enfermos e crianças pequenas para evitar procedimentos mais invasivos, como biópsias e punções de gânglios.

Viability and molecular authentication of Coccidioides spp. isolates from the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo culture collection, Brazil / Viabilidade e autenticação molecular de isolados de Coccidioides spp. da coleção de culturas do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Brasil

Coccidioidomycosis is an emerging fungal disease in Brazil; adequate maintenance and authentication of Coccidioides isolates are essential for research into genetic diversity of the environmental organisms, as well as for understanding the human disease. Seventeen Coccidioides isolates maintained under mineral oil since 1975 in the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) culture collection, Brazil, were evaluated with respect to their viability, morphological characteristics and genetic features in order to authenticate these fungal cultures. Only five isolates were viable after almost 30 years, showing typical morphological characteristics, and sequencing analysis using Coi-F and Coi-R primers revealed 99% identity with Coccidioides genera. These five isolates were then preserved in liquid nitrogen and sterile water, and remained viable after two years of storage under these conditions, maintaining the same features.

Coccidioidomicose é uma doença emergente no Brasil; a manutenção adequada e autenticação de isolados de Coccidioides spp são essenciais para a pesquisa em diversidade genética de micro-organismos, bem como para a compreensão da doença em humanos. Dezessete isolados de Coccidioides preservados em óleo mineral desde 1975 na coleção de culturas do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) foram avaliados com relação à viabilidade, características morfológicas e genéticas, com o objetivo de autenticação das culturas fúngicas. Dos 17 isolados, apenas cinco foram viáveis após quase 30 anos mantidos em óleo mineral, apresentando características morfológicas e moleculares típicas do gênero, o sequenciamento utilizando os oligonucleotídeos Coi-F e Coi-R revelou identidade de 99% com isolados de Coccidioides. Estes cinco isolados foram preservados em nitrogênio líquido e água destilada esterilizada, e permaneceram viáveis após dois anos de armazenamento sob estas condições, mantendo as mesmas características.

Factors associated with hyperglycemia and low insulin levels in children undergoing cardiac surgery with cardiopulmonary bypass who received a single high dose of methylprednisolone

OBJECTIVES: Administering steroids before cardiopulmonary bypass in pediatric heart surgery modulates systemic inflammatory response syndrome and improves postoperative recovery. However, the use of steroids aggravates hyperglycemia, which is associated with a poor prognosis. Adult patients with systemic inflammatory response syndrome usually evolve with hyperglycemia and high insulin levels, whereas >90% of pediatric patients exhibit hyperglycemia and low insulin levels. This study aims to determine: A) the metabolic and inflammatory factors that are associated with hyperglycemia and low insulin levels in children who underwent cardiac surgery with cardiopulmonary bypass and who received a single high dose of methylprednisolone and B) the best predictors of insulin variation using a mathematical model. METHODS: This preliminary study recruited 20 children who underwent heart surgery with cardiopulmonary bypass and received methylprednisolone (30 mg/kg) immediately after anesthesia. Among the 20 patients initially recruited, one was excluded because of the absence of hyperglycemia and lower insulin levels after surgery. However, these abnormalities were confirmed in the remaining 19 children. The C-peptide, CRP, IL-6, and adrenomedullin levels were measured before surgery, immediately after cardiopulmonary bypass, and on the first, second, and third days after cardiac surgery. RESULTS: IL-6, CRP, and adrenomedullin increments were observed, whereas the C-peptide levels remained within reference intervals. CONCLUSION: The multiple regression model demonstrated that in addition to age and glycemia (two well-known factors that are directly involved in glucose metabolism), adrenomedullin and IL-6 levels were independent factors associated with lower insulin concentrations. These four parameters were responsible for 64.7% of the observed insulin variances. In addition, the fact that C-peptide levels did not fall together with insulin could have grounded the medical decision not to administer insulin to patients.

Mediadores pró-inflamatórios e antinflamatórios na sepse neonatal: associação entre homeostase e evolução clínica / Pro-inflammatory and anti-inflammatory mediators in neonatal sepsis: association between homeostasis and clinical outcome

OBJETIVO: avaliar a utilidade de citocinas pró-inflamatórias (TNF-±, IL-1² e IL-6) e de citocinas anti-inflamatórias (IL-10 e IL-1Ra) no diagnóstico da sepse neonatal, e verificar se a homeostase entre estes mediadores poderia ser determinante para a evolução clínica da doença. MÉTODO: coorte prospectiva compreendendo 31 recém-nascidos (RN) com diagnóstico de sepse neonatal, classificados em dois grupos: sepse e sepse grave, com evolução complicada (choque, falência múltipla de órgãos, óbito). Os níveis séricos de TNF-±; IL-1²; IL-6; IL-10 e IL-1Ra foram mensurados nos dias 0 (diagnóstico), 3 e 7 (evolutivos)...

Objectives: to evaluate the utility of pro-inflammatory cytokines (TNF-a, IL1-b, and IL-6) and anti-inflammatory cytokines (IL-10 and IL-1Ra) for the diagnosis of neonatal sepsis, and toverify if the homeostasis of these mediators might determine the clinical outcome. Method:prospective cohort study including 31 newborns with neonatal sepsis whose diagnosis wasmade on the basis of clinical signs and positive blood culture, or high C-reactive protein. Newbornswere classified in two groups: sepsis and favorable outcome, and severe sepsis with unfavorableoutcome (septic shock and/or DIVC and/or FMOS and/or death). On days 0 (diagnosis), 3 and 7after diagnosis, serum levels of TNF-a, IL-1b, IL-6, IL-10, and IL-1Ra were measured...

Epstein-Barr virus nuclear antigen-2 detection and typing in immunocompromised children correlated with lymphoproliferative disorder biopsy findings

Epstein-Barr virus (EBV), the causative agent of infectious mononucleosis, plays a significant role as a cofactor in the process of tumorigenesis, and has consistently been associated with a variety of malignancies especially in immunocompromised patients. Forty-four children and adolescents (21 liver transplant patients, 7 heart transplant, 5 AIDS, 3 autoimmune hepatitis, 2 nephritic syndromes, 2 medullar aplasia, 2 primary immunodeficiency disorder patients, 1 thrombocytopenic purpura and 1 systemic lupus erythematosus) presenting with chronic active EBV infection (VCA-IgM persistently positive; VCA-IgG > 20 AU/mL and positive IgG _ EBNA) had peripheral blood samples obtained during clinically characterized EBV reactivation episodes. DNA samples were amplified in order to detect and type EBV on the basis of the EBNA-2 sequence (EBNA2 protein is essential for EBV-driven immortalization of B lymphocytes). Although we have found a predominance of type 1 EBNA-2 virus (33/44; 75 percent), 10 patients (22.73 percent) carried type 2 EBNA-2, and one liver transplant patient (2.27 percent) a mixture of the two types, the higher proportion of type 2 EBV, as well as the finding of one patient bearing the two types is in agreement with other reports held on lymphoproliferative disorder (LPD) patients, which analyzed tumor biopsies. We conclude that EBNA-2 detection and typing can be performed in peripheral blood samples, and the high prevalence of type 2 in our casuistic indicates that this population is actually at risk of developing LPD, and should be monitored.

Diagnosis of neonatal group B Streptococcus sepsis by nested-PCR of residual urine samples

Group B streptococcus (GBS) remains the most common cause of early-onset sepsis in newborns. Laboratory gold-standard, broth culture methods are highly specific, but lack sensitivity. The aim of this study was to validate a nested-PCR and to determine whether residue volumes of urine samples obtained by non invasive, non sterile methods could be used to confirm neonatal GBS sepsis. The nested-PCR was performed with primers of the major GBS surface antigen. Unavailability of biological samples to perform life supporting exams, as well as others to elucidate the etiology of infections is a frequent problem concerning newborn patients. Nevertheless, we decided to include cases according to strict criteria: newborns had to present with signs and symptoms compatible with GBS infection; at least one of the following biological samples had to be sent for culture: blood, urine, or cerebrospinal fluid; availability of residue volumes of the samples sent for cultures, or of others collected on the day of hospitalization, prior to antibiotic therapy prescription, to be analyzed by PCR; favorable outcome after GBS empiric treatment. In only one newborn GBS infection was confirmed by cultures, while infection was only presumptive in the other three patients (they fulfilled inclusion criteria but were GBS-culture negative). From a total of 12 biological samples (5 blood, 3 CSF and 4 urine specimen), eight were tested by culture methods (2/8 were positive), and 8 were tested by PCR (7/8 were positive), and only 4 samples were simultaneously tested by both methods (1 positive by culture and 3 by PCR). In conclusion, although based on a restricted number of neonates and samples, our results suggest that the proposed nested-PCR might be used to diagnose GBS sepsis as it has successfully amplified the three types of biological samples analyzed (blood, urine and cerebrospinal fluid), and was more sensitive than culture methods as PCR in urine confirmed diagnosis...

O estreptococo do grupo B (GBS) constitui a causa mais freqüente de sepse neonatal precoce. O teste de referência continua sendo o isolamento em cultura, apesar de apresentar problemas de sensibilidade. O objetivo do presente estudo foi validar uma técnica de dupla amplificação e determinar a possibilidade do uso de amostras residuais de urina colhidas por método não invasivo, não estéril, para a confirmação da sepse por GBS em recém-nascidos. As amostras foram amplificadas com primers do principal gene de superfície do GBS. A insuficiência de volume de material biológico para a realização de exames para suporte de vida, além de outros necessários à identificação do agente etiológico de infecções é muito freqüente em recém-nascidos. Mesmo assim, decidimos definir critérios bastante rigorosos para a inclusão de pacientes na casuística: os recém-nascidos deveriam apresentar sinais e sintomas compatíveis com infecção pelo GBS; deveriam ter tido ao menos uma amostra enviada para cultura, podendo ser sangue, urina ou líquor; disponibilidade de volumes residuais dessas amostras, ou de outras colhidas no dia da hospitalização, antes da introdução da antibioticoterapia, de forma a possibilitar a análise por PCR, e evolução favorável com a antibioticoterapia empírica. Em apenas um dos quatro recém-nascidos a infecção foi confirmada por cultura, enquanto nos outros três casos a infecção foi considerada presuntiva (pacientes preencheram os critérios de inclusão, mas o GBS não foi isolado). De um total de 12 amostras dos quatro pacientes (5 de sangue, 3 de líquor e 4 de urina), 8 foram testadas por cultura (2 foram positivas), 8 foram testadas por PCR (7 foram positivas), e apenas 4 pelos dois métodos simultaneamente (1 positiva por cultura e 3 por PCR). Concluímos que apesar do número restrito de pacientes e de amostras testadas, os resultados apresentados sugerem que a amplificação proposta poderia ser usada para o diagnóstico...

Identification and differentiation of Candida species from pediatric patients by random amplified polymorphic DNA

Thirty-four Candida isolates were analyzed by random amplified polymorphic DNA using the primer OPG-10:24 Candida albicans; 4 Candida tropicalis; 2 Candida parapsilosis; 2 Candida dubliniensis; 1 Candida glabrata and 1 Candida krusei. The UPGMA-Pearson correlation coefficient was used to calculate the genetic distance between the different Candida groupings. Samples were classified as identical (correlation of 100 percent); highly related samples (90 percent); moderately related samples (80 percent) and unrelated samples (< 70 percent). The results showed that the RAPD proposed was capable of classifying the isolates coherently (such that same species were in the same dendrogram), except for two isolates of Candida parapsilosis and the positive control (Netherlands, 1973), probably because they are now recognized as three different species. Concerning the only fluconazole-resistant Candida tropicalis isolate with a genotype that was different to the others, the data were insufficient to affirm that the only difference was the sensitivity to fluconazole. We concluded that the Random Amplified Polymorphic DNA proposed might be used to confirm Candida species identified by microbiological methods.

Trinta e quatro isolados de Candida foram analisados por amplificação aleatória de DNA polimórfico (primer OPG-10): 24 Candida albicans, 4 Candida tropicalis, 2 Candida parapsilosis, 2 Candida dubliniensis, 1 Candida glabrata e 1 Candida krusei. O coeficiente de correlação de Pearson-UPGMA calculou a distância genética entre os diferentes agrupamentos de Candida: amostras idênticas (100 por cento de correlação), amostras muito relacionadas (90 por cento), moderadamente relacionadas (80 por cento), e não relacionadas (< 70 por cento). Os resultados demonstram que a amplificação aleatória de DNA polimórfico proposta é capaz de classificar os isolados de forma coerente, ficando os de mesma espécie em um mesmo dendograma, com exceção dos dois isolados de Candida parapsilosis e o controle positivo (Holanda, 1973), provavelmente por serem atualmente classificadas em três espécies diferentes. Quanto ao único isolado de Candida tropicalis resistente ao fluconazol com genótipo diferente dos outros, os dados não são suficientes para afirmar que a única característica distinta fosse a sensibilidade ao fluconazol. Concluímos que a amplificação aleatória de DNA polimórfico proposta poderia ser usada para a confirmação das espécies de Candida identificadas nos testes microbiológicos.

Identificação de cinco espécies de Candida pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e por hemoculturas em pacientes pediátricos com risco para candidemia / Identification of five Candida species by PCR and blood cultures in pediatric patients at-risk of candidemia

As infecções sistêmicas causadas por Candida spp. representam importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes pediátricos internados em unidades de cuidados intensivos. A utilização de fármacos imunodepressores em pacientes submetidos a transplantes, antibioticoterapia prolongada, nutrição parenteral, presença de cateter venoso central, entre outros fatores, contribuem para o aumento na freqüência destas infecções oportunísticas. Embora Candida albicans permaneça como a espécie mais freqüentemente isolada de episódios de candidemia, tem ocorrido aumento do número de infecções causadas por espécies não albicans. Os métodos convencionais de cultivo apresentam sensibilidade limitada, além de demandar tempo prolongado para a identificação das espécies infectantes. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) requer pequenos volumes de sangue para análise, situação ideal para crianças gravemente enfermas, propiciando diagnóstico rápido e identificação precisa das espécies de Candida. Este estudo teve como objetivos padronizar técnicas de PCR de dupla amplificação, para identificar cinco espécies de Candida em amostras de sangue de pacientes pediátricos com risco de desenvolver candidemias, e comparar os resultados com as hemoculturas. Foram analisadas amostras de sangue de 80 pacientes pediátricos internados na Unidade de Terapia Intensiva do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da FMUSP, alocados em dois grupos: 58 pacientes que apresentavam duas ou mais condições predisponentes que elevam o risco de infecção fúngica (Grupo 1); e 22 pacientes em condições clínicas de menor gravidade e risco mais baixo, que foram estudados para avaliação da freqüência de resultados falso-positivos por PCR (Grupo 2). A primeira amplificação identificou fragmento da região ITS do DNA ribossômico, e a segunda etapa amplificou fragmentos espécie-específicos para C.albicans, C.glabrata, C.parapsilosis, C.tropicalis e C.krusei. Para as amostras com detecção de Candida spp...

Disseminated candidiasis is an important cause of morbidity and mortality in immunocompromised and critically ill pediatric patients. Increased use of immunosupressive drugs, indwelling catheters, broad-spectrum antibiotics, parenteral nutrition and other predisposing conditions have contributed to the increment of Candida bloodstream infections. Although Candida albicans remains the leading species, a growing number of nonalbicans isolates has been reported. Laboratory diagnosis of candidemia is troublesome due to the lack of blood cultures sensitivity. Detection of Candida DNA by polymerase chain reaction (PCR) in tiny blood volumes may provide a more rapid and reliable candidemia detection in critically ill children. The present study aimed at standardizing nested-PCR amplifications for identification of five Candida species, comparing results with those obtained by blood cultures. Eighty patients admitted to the pediatric intensive care unit of the Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo were divided into two groups: 58 patients presenting with two or more predisposing conditions to develop candidemia (Group 1), and 22 patients with lower risk, enrolled to establish the frequency of PCR false-positive results (Group 2). Nested amplifications were targeted to Candida ITS sequence, the first round yielding a gender specific fragment, and the second round identified five Candida species corresponding to C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis and C. krusei. When PCR positive results were not confirmed by blood cultures, enzymatic restriction and DNA sequencing were performed. Agreement between both methods was assessed by the McNemar test, adopting a level of significance of 5%. Blood cultures were positive in 15.5% of group 1 patients, whereas nested-PCR identified Candida species in 25.9%, including all culture positive patients. PCR was 88.9% concordant with blood cultures...

Comparação de quatro sistemas de amplificação de DNA polimórfico (RAPD) para avaliar a distância genética e susceptibilidade ao fluconazol de amostras de Candida tropicalis isoladas de pacientes pediátricos / Camparison of four random amplified polymorphic DNA (raPD) systems to assess genetic relatedness and fluconazole susceptibility of Candida tropicalis pediatric isolates

O isolamento de Candida através de culturas pode resultar em falhas na identificação de espécies não albicans. A tipagem molecular po RAPD é rápida e capaz de identificar as espécies. Vinte e seis isolados de Candida tropicalis (20 sensíveis e 6 resistentes ao fluconazol...

Isolation of Candida sp by cultures may be faulty in the identification of nonalbicans species. This task has been promptly and accurately attained through molecular typing by RAPD. Twenty-six samples of Candida tropicalis, 20 sensitive and 6 resistants to fluconazole...

Frequency of the deltaF508 mutation in 108 cystic fibrosis patients in São Paulo: comparison with reported Brazilian data

OBJETIVO: Analisar a freqüência da mutação delta F508 (DF508) em 108 pacientes não aparentados, com fibrose cística e comparou os resultados com os dados de outros estudos brasileiros. A fibrose cística (CF) constitui a doença genética mais comum em populações caucasianas, sendo a DF508 a mais freqüente dentre as mutações relacionadas à doença. MÉTODO: A freqüência da DF508 foi analisada por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) seguida de detecção em géis de poliacrilamida a 8%. RESULTADOS: Vinte e três dos 108 pacientes foram homozigotos para a mutação (21,3%), 50 foram heterozigotos (46,3%) e os 35 restantes não eram portadores da DF508 (32,4%). Em termos de alelos, foram observados 96 mutados (44,45%) e 120 do tipo selvagem (55,55%), ou seja, não portadores da mutação. CONCLUSAO: A freqüência de 44,45% de alelos mutados encontrada no estudo é mais elevada que os 33,0% descritos em pesquisa realizada em São Paulo em 1993, e ligeiramente mais baixa que os 48,0% encontrados em relatos mais recentes. Além disso, nossos resultados corroboraram a idéia de que a freqüência da mutação DF508 é mais baixa no Brasil em comparação a países europeus e nos Estados Unidos da América (cerca de 70,0%), provavelmente devido a maior miscigenação racial. Estas observações terão que ser consideradas antes da implementação de testes genéticos de triagem no Brasil.

Detection of EBV-DNA in serum samples of an immunosuppressed child during a three years follow-up: association of clinical and PCR data with active infection

Vinte e quatro amostras de sangue total e de soro foram colhidas durante seguimento por 36 meses de criança de oito anos de idade, imunodeprimida devido a transplante cardíaco. O paciente apresentou VCA-IgG e IgM positivos e EBNA-IgG negativo aos cinco anos de idade quando foi diagnosticada mononucleose infecciosa. Quatorze meses depois o VCA-IgG e o EBNA-IgG eram positivos e o VCA-IgM negativo. Este padrão sorológico persiste desde aquela época mesmo durante episódios sugestivos de reativação. As amostras de sangue total e de soro foram analisadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) que amplificou fragmento oriundo da gp220 do EBV (detecção de 100 cópias virais). Todas as 24 amostras de sangue total e 12 amostras de soro foram positivas por PCR. Com o objetivo de verificar se a detecção de DNA do EBV em soro estaria associada à reativação da doença, os resultados de PCR foram analisados em relação à necessidade de hospitalização e uso de anti-viral. O teste de Kappa mostrou que existe concordância entre a presença de DNA do EBV em soro e a necessidade de hospitalização e tratamento com anti-virais (valor de 0,750; p < 0,001). Concluímos que a detecção de DNA do EBV em amostras de soro de pacientes imunosuprimidos poderia ser usada como marcador laboratorial de atividade da infecção quando técnicas quantitativas de amplificação não estiverem disponíveis.

Atypical disseminated cutaneous histoplasmosis in an immunocompetent child, caused by an aberrant variant of Histoplasma capsulatum var. capsulatum

O presente trabalho registra caso de histoplasmose em paciente de 5 anos, HIV negativo, natural e procedente da cidade da Sao Paulo, com lesoes cutaneas nao diagnosticadas clinicamente. Exame histopatologico negativo para infeccao fungica. Cultivos em duas ocasioes, positivos para Histoplasma capsulatum var. capsulatum (amostras 361 e 387). Sorologia negativa para anticorpos anti-Histoplasma capsulatum e Paracoccidioides brasiliensis pelas provas de Imunodifusao dupla e ...

Paracoccidioides brasiliensis: a mycologic and immunochemical study of two strains

Os autores estudaram do ponto de vista micologico, imunoquimico e de sua biologia molecular, duas amostras de Paracoccidioides brasiliensis, uma isolada do solo, no municipio de IBIA (MG) por Silva-Vergara et al (1996,1998) denominada IBIA e outra, BAT, cultivada de um caso humano de paracoccidioidomicose em Ribeirao Preto (SP) por Freitas da Silva (1996). Tais amostras apresentam colonias cotonosa (M) e leveduriforme (L ou Y), sendo patogenicas para cobaios inoculados por via testicular, produzindo orquite granulomatosa e/ou supurativa. Do ponto de vista imunoquimico, atraves de provas de Imunodifusao dupla, Imunoeletroforese e Western Blotting, foi demostrada a presenca da gp43

Coccidioidomycosis in Brazil: a case report

Coccidioidomicose e infecçäo endemica com distribuiçäo geográfica relativamente limitada: Mexico, Guatemala, Honduras, Colombia, Venezuela, Bolivia, Paraguai, Argentina e Sudeste dos Estados Unidos. Nestes paises, a area endemica esta restrita a regiöes deserticas ou semiaridas, semelhantes as do Nordeste do Brasil. Registro do caso: paciente masculino de 32 anos, nascido no Estado da Bahia (Nordeste do Estado), vivendo ha seis anos em Säo Paulo (Sudeste). Foi admitido no Departamento de Pneumologia do Hospital das Clínicas em outubro de 1996, com historia de tosse produtiva e progressiva ha seis meses, febre, mal estar, calafrios, perda de peso, fraqueza e artralgia das pequenas articulaçöes...

Paracoccidioides brasiliensis: a mycologic and immunochemical study of a sample isolated from a armadillo (Dasipus novencinctus)

Amostra de Paracoccidioides brasiliensis isolada de visceras (baco e figado) de um tatu (Dasipus novencintus)foi estudada no ponto de vista micologico e imunoquimico. O tatu havia sido capturado em area da usina hidroeletrica de Tucurui (Estado do Para). Este ja havia sido considerado como reservatorio enzootico do Paracoccidioides brasiliensis naquela regiao. Esta amostra, conservada na Micoteca do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo sob o numero 135, apresenta todas as caracteristicas de Paracoccidioides brasiliensis, com elevado poder antigenico e baixa virulencia para cobaios e ratos Wistar. A demonstracao do exo-antigeno especifico do P. brasiliensis, representado pela glicoproteina de peso molecular 43 KDa, foi evidente atraves das tecnicas de Imunodifusao Dupla, Imunoeletroforese, SDS-PAGE e Imunoblotting.

Inoculaçäo de antígeno contendo a glicoproteína 43kDa do Paracoccidioides brasiliensis em testículo de hamsters / Intratesticular inoculation of Paracoccidioides brasiliensis antigen containing 43kDa glycoprotein in hamsters

Após um período de cinco semanas à inoculaçäo de antígeno (contendo a glicoproteína de peso molecular 43KDa) puro e diluído a 1/100, em testículo de hamsters, bem como o antígeno controle nas mesmas condiçöes, näo foram identificadas quaisquer alteraçöes histopatológicas tanto local como sistêmica, em órgäo do SRE. Este fato permite concluir que, em tais condiçöes de experimentaçäo, a gp 43 parece näo estar vinculada à virulência do Paracoccidioides brasiliensis

Obtençäo de exoantígenos de Histoplasma capsulatum em meio de neopeptona, glicose, tiamina e asparagina (NGTA) / Obtention of histoplasma capsulatum exoantigens in neopeptone, glucose, thiamine and aspargine (NGTA) media

O presente trabalho teve como objetivo a produçäo de exoantígenos H e M das amostras 58, B-811 e O187 de Histoplasma capsulatum, utilizando o meio NGTA (neopeptona, glicose, tiamina e asparagina) em períodos de cultivo de 1, 2 e 3 meses, a 36-C, sob agitaçäo constante (50 v.p.m.). Os antígenos brutos foram avaliados contra anti-soro e antígeno de Histoplasma capsulatum de referência (Center for Disease Control), 4 soros de pacientes portadores de paracoccidioidomicose, 7 de histoplasmose e soro hiperimune anti-H. capsulatum produzido em coelhos, através da reaçäo de imunodifusäo dupla. Verificou-se que, com excesäo de B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos apresentaram as fraçöes H e M de precipitaçäo. Os exoantígenos obtidos de A-811 apresentaram só a banda H. Excetuando-se os exoantígenos 58 e B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos reagiram contra soros de pacientes com histoplasmose. Em relaçäo aos soros de pacientes com paracoccidioidomicose, somente os exoantígenos 58 e O187 näo apresentaram reaçäo cruzada. Todos os exoantígenos reagiram frente ao soro hiperimune de coelho anti-H. capsulatum. Para obtençäo de exoantígenos de H. capsulatum, sugerimos que as amostras sejam cultivadas sob as condiçöes anteriormente descritas, adotando-se o período de 3 meses de crescimento, utilizando-se exoantígenos de referência como controles da reaçäo